地区：上海市 宝山区
关键词：云南省第一人民医院
成果类型：其它
成果领域：生物与新医药
成果编号：A2021061000001429
成果描述：
| 项目主要技术内容：1.第一部分：发现云南地区汉族BPES家系2.第二部分：取患者及家族成员，健康对照的外周血，提取DNA；3.第三部分：FOXL2基因目标扩增片段（g.71-1524）分为三个区域。扩增片段大小预期为580、521和577bp，引物由上海生物工程有限公司合成。三个PCR扩增片段产物做2%琼脂糖凝胶电泳。在发现5例患者的P2F-P2R PCR产物在2.0%琼脂糖凝胶电泳上可见有大小不一的两个片段后，PCR产物经10%聚丙烯酰胺凝胶电泳进行确定。4.第四部分：在经10%聚丙烯酰胺凝胶电泳证实5例患者P2F-P2R PCR产物确实为两个片段后，将PCR产物纯化，并克隆到Puc18载体中，转染DH5a大肠杆菌细胞。挑取阳性克隆，并提取质粒，随后用ABI- 3100DNA测序仪进行序列测定。测序引物为BcaBEST序列通用引物RV-M: 5’-GAACGGATAACAATTTCACACAGG -3’和M13-47: 5’-CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’。结果表明本家系关键的致病基因是FOXL2基因插入突变（g.933-965dup）；5.第五部分：该研究采用MDR 2.0版本(http://sourceforge.net/projects/mdr/)，用来分析BPES表型和上述三个方面FOXL2基因的突变之间的关系。检验结果分别用Odds(OR)，准确性、敏感性和特异性来预测BPES表型与变量将相关性，双侧检验以P＜0.05为有统计学意义。研究核心发现点和科学价值：1.该研究的汉族Ⅱ型BPES家系当中，关键的致病基因是FOXL2基因插入突变（g.933-965dup）；该研究结果首次报道了该位点的基因突变，GenBank ID：DQ016609.已经被人类FOXL2基因突变数据库收录。2.发现了不同FOXL2基因变异与BPES表型之间倾向性，为进一步研究本病提供了新的依据。3.研究论文已经被SCI收录，同时被SCI论文引用2次；4.科技查新结果表明该研究属于国内领先；5.由云南省卫计委组织有关专家评定，结论为国内领先。获2015年度云南卫生科技成果三等奖。应用推广情况：上述发现拓宽了这类疾病临床和基础研究的视野，自2009年起，该院眼科在该类遗传性疾病的遗传咨询，临床表型分析方面应用于临床，并在云南省妇幼保健院、昆明市妇幼保健院、曲靖地区第二人民医院、保山市第一、第二人民医院、德宏州第二人民医院等广泛用于本病的遗传咨询以及出生缺陷预防咨询。通过课题研究，积累了眼病遗传学研究经验，作为前期铺垫，课题组申请到了云南省科技计划项目”一个先天性眼球震颤的遗传学研究”和”fuchs角膜内皮营养不良一彝族家系三个候选致病基因的序列测定与蛋白结构和功能预测”；相关研究内容举办省级继教项目3次。对提升遗传性眼病的临床和基础研究奠定了坚实的基础 |
